Вестерн-блоттинг

Это метод иммуноанализа, который обнаруживает специфические белки в крови или ткани. Он объединяет стадию электрофореза с этапом, который переносит разделенные белки на мембрану. Вестерн-блот часто используется в качестве контрольного теста для подтверждения присутствия антитела и для диагностики состояния. Примерами его использования являются подтверждающие ВИЧ-инфекции и тесты на болезнь Лайма.

Для выполнения теста вестерн-блоттинга образец, содержащий белок, наносят на пятно вдоль одного конца слоя геля. Несколько образцов и контроль могут быть размещены бок о бок вдоль одного конца геля на отдельных дорожках. Электрический ток заставляет белки в образце перемещаться по гелю, разделяя белки по размеру и форме и формируя полосы. Затем эти образцы и контрольные лестницы «смываются» на тонкую мембрану, которая контактирует с гелем. Маркированные или меченые антитела затем используются в одно- или двухстадийном процессе для обнаружения белков, связанных с мембраной. Например, для подтверждения тестов на антитела к ВИЧ или лайму белки разделены на те, которые связаны с возбудителем. Затем к блоту добавляют образец пациента, и любые антитела к организму связываются, а затем обнаруживаются мечеными антителами к человеческим иммуноглобулинам. Присутствие определенных белков интерпретируется по сравнению с известными отрицательными или положительными контрольными образцами в других полосах.

Другие статьи