войти
Набор реагентов для синтеза первой цепи кДНК RevertAid™
Описание
Набор реагентов для синтеза первой цепи кДНК RevertAid™ представляет собой оптимизированную систему для эффективного синтеза кДНК с мРНК или общей РНК в качестве матриц.
В состав набора входит обратная транскриптаза (ОТ) RevertAid™, которая представляет собой генетически модифицированную обратную транскриптазу M-MuLV. ОТ RevertAid™ является РНК- и ДНК-зависимой ДНК-полимеразой с максимальной активностью при 42 °С (активна до 50 °С). Она способна синтезировать первую цепь кДНК длиной до 13000 пар нуклеотидов и встраивать в растущую цепь ДНК модифицированные нуклеотиды (например, нуклеотиды, содержащие красители Cy3, Cy5, остатки родамина, аминоаллила и флуоресцеина). Фермент проявляет свойства рибонуклеазы H по отношению к РНК в гибридах РНК-ДНК, что приводит к появлению укороченных фрагментов кДНК. Однако ОТ RevertAid™ характеризуется значительно более низкой способностью осуществлять функцию РНКазы Н по сравнению с обратной транскриптазой птичьего вируса миелобластоза (AMV).Рекомбинантная форма ингибитора рибонуклеаз RiboLock™ предотвращает деградацию РНК-матрицы рибонуклеазами А, В и С при температурах ниже 55 °С.
Состав пятикратного буфера для реакции: 250 мМ Трис-HCl (рН 8,3), 250 мМ KCl, 20 мМ MgCl2, 50 мМ ДТТ.
Смесь dNTP представляет собой 10 мM водный раствор предварительно добавленных растворов dATP, dTTP, dCTP и dGTP.
Вода без примеси нуклеаз используется для разбавления образцов РНК. В ней отсутствуют эндо- и экзодезоксирибонуклеазы, рибонуклеазы и фосфатазы.
В состав набора входят праймер оligo(dT)18 и гексамер произвольной последовательности. Гексамер произвольной последовательности связывается с нуклеиновой кислотой неспецифически и применяется при синтезе кДНК с любой РНК, входящей в состав общей клеточной РНК. Праймер оligo(dT)18 позволяет синтезировать кДНК только с мРНК, содержащей на 3ꞌ-конце последовательность polyA, c которой он гибридизуется. Набор реагентов для синтеза первой цепи кДНК RevertAid™ также рассчитан на использование праймеров, специфически взаимодействующих с определенными последовательностями мРНК.
Синтезированная кДНК может быть сразу использована в ПЦР или ПЦР в реальном времени, для синтеза второй цепи кДНК или для амплификации линейной РНК.
Для проверки качества в набор включены контрольная мРНК (1300 нуклеотидных остатков), полученная в результате транскрипции in vitro гена GAPDH человека, а также праймеры, комплементарные генам GAPDH мыши, крысы и человека. ОТ-ПЦР с использованием 100 фг мРНК гена GAPDH и контрольных праймеров к нему позволяет получить кДНК длиной 496 звеньев.
Области применения набора:
- синтез первой цепи кДНК для ПЦР с обратной транскрипцией;
- создание библиотек кДНК;
- создание проб для гибридизации, в том числе на микрочипах;
- синтез антисенсовых последовательностей к РНК.
Условия хранения: -70 °С для контрольной мРНК гена GAPDH, -20 °С для остальных компонентов набора.
Отзывы
На этот товар нет ни одного отзыва